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在非人灵长类动物中,通过体细胞核移植(SCNT)生产同源胚胎所需的足够数量卵母细胞难以获得。基于这一因素,利用异种卵母细胞进行种间体细胞核移植(iSCNT)是一种具有吸引力的替代方法。本研究的目的是使用去核牛(Bos taurus)减数分裂中期II(MII)卵母细胞和成年恒河猴(Macaca mulatta)成纤维细胞生产来源于iSCNT的囊胚。
通过活检采集一只6岁雄性恒河猴的耳部皮肤组织,并分离成纤维细胞。从牛卵巢中采集未成熟的卵丘-卵母细胞复合体,并在Medium 199中进行体外成熟。将去核卵母细胞与恒河猴成纤维细胞重构,并在改良合成输卵管液中培养iSCNT胚胎,在含5–5.5% CO2的气体环境下,于不同条件(37–39 °C和5–20% O2)培养,以考察体外培养条件的影响。
大多数胚胎发育停滞于8细胞期或16细胞期,在总计1153枚经培养的激活胚胎中,仅通过iSCNT获得了3枚囊胚(生产率为0.26%)。其中两枚囊胚采用双苯并咪唑染色法用于核数计数,结果分别为51和24。另一枚来源于iSCNT的囊胚用于通过PCR分析线粒体DNA(mtDNA),结果检测到恒河猴和牛两者的mtDNA。
尽管发育率极低,本研究证实,采用两个系统发育关系较远的物种(其中包括灵长类)进行iSCNT可以产生囊胚。随着发育率的提高,未来有可能建立来源于恒河猴iSCNT的胚胎干细胞系,用于研究灵长类细胞核与牛线粒体之间相互作用机制。